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ELISA夾心法測定單抗的使用方法
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ELISA夾心法測定單抗的使用方法:
1、首先將試劑盒恢復室溫(大約30分),然后用純水把清洗液配成工作濃度(一份濃縮清洗液加19份純水)。
2、取出酶標板。每個標本需要6孔,陽性對照6孔。多余的用自封袋保存,記得放入干燥劑。
3、將細胞培養(yǎng)上清(或特異親和純化的抗體)50μl加入酶標微孔板,每個標本加6孔,陽性對照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
4、棄去板內液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl,通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
5、吸棄板內液體,洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl,換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結果,看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應終止液(每孔50μl)終止反應后用酶標儀450nm測定波長,630nm參考波長雙波長測定結果,參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。陽性對照0D小于0.5實驗無效,需要重做。
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