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紫外分析儀可用于核酸蛋白檢測(cè)儀中
紫外-可見光分光光度計(jì)在生物科技中可用于測(cè)定核酸和蛋白質(zhì)的濃度。首先,核酸的基本結(jié)構(gòu)單位是核苷酸。核苷酸由一個(gè)含氮堿基(嘌呤或嘧啶),一個(gè)戊糖(核糖或脫氧核糖)和一個(gè)或幾個(gè)磷酸組成。由于核酸的堿基具有共軛雙鍵,因而有紫外吸收的性質(zhì)。各種堿基、核苷和核苷酸的吸收光譜略有區(qū)別。核酸的紫外吸收峰在260nm附近,可用于測(cè)定核酸。根據(jù)260nm與280nm的吸收光度(A260)可判斷核酸純度。
再談蛋白質(zhì),構(gòu)成它的組成是氨基酸,其中的種類包含酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸,這幾種芳香族氨基酸的苯環(huán)含有共軛雙鍵,使蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)。吸收高峰在280nm處,其吸光度(即光密度值)與蛋白質(zhì)含量成正比。所以,紫外吸收法是280nm的光吸收法,含有核酸的蛋白質(zhì)溶液使用280和260nm的吸收差法較好。蛋白質(zhì)的稀溶液采用215與225nm的吸收差法。此外,蛋白質(zhì)溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比。利用一定波長(zhǎng)下,蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān)系,可以進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。紫外吸收法簡(jiǎn)便、靈敏、快速,不消耗樣品,測(cè)定后仍能回收使用。
還有一些測(cè)定蛋白質(zhì)的方法,是通過蛋白質(zhì)與一些物質(zhì)的作用產(chǎn)生顏色,然后在此有色光光譜內(nèi)測(cè)定吸光度。將已知濃度的蛋白質(zhì)溶液稀釋幾個(gè)倍數(shù),與物質(zhì)作用后作為標(biāo)準(zhǔn)品,測(cè)定吸光度做出一條曲線,然后未知溶液的濃度就可通過吸光度來得出。這些方法包括,凱氏定氮法,考馬斯亮藍(lán)法(Bradford),F(xiàn)olin-酚試劑法(Lowry法)和BCA法。
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