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單克隆抗體脾細胞選擇
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http://www.bioboke.com/
單克隆抗體脾細胞選擇
材料
(1)**過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。
(2)1640培養液 單克隆抗體制備流程
(3)2.5%FCS-1640營養液
操作方法
(1)拉頸或用CO2處死小白鼠。
(2)將小鼠放于70%酒精中浸泡**,取出固定于板上,在無菌條件下取脾。
(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下輕輕洗去脾上的紅血球。
(4)用鑷子輕輕擠壓脾,做成脾細胞懸液,用毛細管將懸液移入小試管中。
(5)直立小試管3min,使大塊的結締組織下沉,把細胞懸液移入離心管中。
(6)以2.5%FCS—1640充滿離心管,并以400g離心7min~10min(與此同時應開始制備骨髓細胞)。
(7)把沉淀用約10ml的新鮮培養液再懸浮。
(8)重復⑹、⑺步驟。
(9)計算細胞,以臺盼蘭染色用相差顯微鏡檢查,活細胞數應高于80%為合格。
上一篇:
選擇骨髓瘤細胞的條件
下一篇:
克隆化顯微鏡操作方法
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