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選擇骨髓瘤細(xì)胞的條件
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骨髓瘤細(xì)胞能產(chǎn)生并分泌大量的**球蛋白,這樣的瘤細(xì)胞融合后,可能影響或降低所分泌抗體的滴度,所以必須選育出非分泌**球蛋白缺陷型的骨髓瘤細(xì)胞。
選擇骨髓瘤細(xì)胞的條件:
①該瘤細(xì)胞系的來源應(yīng)與制備脾細(xì)胞小鼠為同一品系,以便兩者的組織相容性抗原一致;
②骨髓瘤細(xì)胞必須是靜息狀態(tài),不產(chǎn)生γ球蛋白或不分泌到細(xì)胞外;
③骨髓瘤細(xì)胞生長需要一個(gè)較高的細(xì)胞密度,*好106個(gè)細(xì)胞/ml;
④生長速度快,繁殖時(shí)間短。常用的Balb/c小鼠產(chǎn)生的骨髓瘤細(xì)胞株有:①S194/5XXO·BU·1;②SP2/0—Ag14(簡稱SP2);③P2—X­—Ag8·6·5·3(簡稱653);④FO以653*為常用,它是由礦物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)誘發(fā)出來的一種漿細(xì)胞瘤(MinerolOilplasmacytoma,MOPC)并經(jīng)過培育形成一株8-氮鳥嘌呤有抵抗力的亞系。
骨髓瘤細(xì)胞一般由有關(guān)單位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,試驗(yàn)時(shí)復(fù)蘇、增殖、傳代即可。由于骨髓瘤細(xì)胞是半貼壁狀態(tài),很容易脫落,因此不需要胰酶處理。為了防止出現(xiàn)返祖現(xiàn)象,在融合前,可將培養(yǎng)基內(nèi)加入15μg/ml8-氮鳥嘌呤。取約1×107~6×107對數(shù)生長期(即培養(yǎng)15h~20h)的骨髓瘤細(xì)胞,在室溫離心(400g)10min,沉淀以2.5%FCS—1640液再懸浮并計(jì)數(shù)。
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