常用名

LFM-A13

英文名

LFM-A13

CAS號(hào)

244240-24-2

分子量

360.001

密度

1.9±0.1 g/cm3

沸點(diǎn)

487.9±45.0 °C at 760 mmHg

分子式

C11H8Br2N2O2

熔點(diǎn)

無(wú)資料

閃點(diǎn)

248.9±28.7 °C

體外研究

LFM-A13顯著抑制BTK活性，IC50為6.2±0.3μg/ mL（= 17.2±0.8μM）。計(jì)算的BTK，JAK1，JAK3，IRK，EGFR和HCK的LFM-A13的Kis為1.4,110,148,31.6,166和214μM。 LFM-A13（200μM）顯著增加ALL-1細(xì)胞對(duì)神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的化學(xué)敏感性[1]。 LFM-A13（100μM）抑制Epo誘導(dǎo)的R10細(xì)胞中EpoR，Jak2，Btk，Stat5和Erk1 / 2的磷酸化。 LFM-A13（100μM）抑制Jak2，Tec和Btk的自磷酸化，而不是COS細(xì)胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 LFM-A13有效抑制Plx1，IC50為10μM;也抑制BRK，BMX，FYN，IC50分別為267,281,240和215μM[4]。

體內(nèi)研究

LFM-A13（25,50和100mg / kg）對(duì)大鼠沒(méi)有明顯的毒性。 LFM-A13（50mg / kg，每周三次，ip）減弱小鼠中DMBA誘導(dǎo)的乳腺腫瘤發(fā)生。 LFM-A13單獨(dú)或與紫杉醇組合顯示出對(duì)BMBB / c小鼠中DMBA誘導(dǎo)的乳腺腫瘤發(fā)生率，平均腫瘤數(shù)量，平均腫瘤重量和大小的顯著影響。 LFM-A13（50 mg / kg，每周三次，腹腔注射）顯著降低PLK1，cyclin D1，CDK-4，P53和Bcl-2的表達(dá)，但增加小鼠p21，IκB，Bax和caspase 3的表達(dá)。 [3]。 LFM-A13（200 mg / kg）不會(huì)對(duì)大鼠造成血液學(xué)毒性。 LFM-A13（10或50mg / kg，ip）在乳腺癌的MMTV / Neu轉(zhuǎn)基因小鼠模型中表現(xiàn)出劑量依賴性的抗腫瘤作用[4]。

激酶實(shí)驗(yàn)

將純化的His6-Plx1（250ng）加入到含有1x激酶緩沖液（10mM Tris-HCl，pH7.5,10mM MgCl2和1mM TT），25μM冷ATP和1μCi的20μL反應(yīng)混合物中[ γ-32P] ATP在不同濃度的LFM-A13存在下，范圍為5μg/ mL（13.9μM）至100μg/ mL（278μM）。將反應(yīng)混合物在室溫下溫育15-30分鐘，并通過(guò)加入2×SDS-PAGE還原樣品緩沖液終止自磷酸化。在冷ATP存在下進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)。然后使用市售的抗Plk抗體對(duì)激酶反應(yīng)進(jìn)行**印跡。印跡證實(shí)每個(gè)反應(yīng)中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我們還檢測(cè)了LFM-A13對(duì)Plx1對(duì)底物磷酸化的影響。簡(jiǎn)而言之，首先將250ng純化的Plx1與不同濃度的LFM-A13在室溫下孵育1小時(shí)。孵育1小時(shí)后，將含有反應(yīng)混合物的試管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽（254-316）（200ng），激酶緩沖液和[γ-32P] ATP并激活反應(yīng)允許在室溫下進(jìn)行15分鐘。用抗Cdc25抗體的印跡用于證實(shí)在每種反應(yīng)混合物中存在等量的底物肽。在測(cè)定中使用抗Plk抗體，谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）和ECL試劑盒的多克隆抗體。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定實(shí)驗(yàn)中使用增加濃度的[γ-32P] ATP和純化的N-末端His6-標(biāo)記的重組人PLK3，殘基19-301，在Sf21昆蟲(chóng)細(xì)胞中由桿狀病毒表達(dá)來(lái)檢測(cè)。簡(jiǎn)言之，在25μL的*終反應(yīng)體積中，將PLK3（h）（5-10mU）與8mM MOPS，pH 7.0,0.2mM EDTA，2mg / mL酪蛋白，10mM乙酸鎂和[γ]一起溫育。 -32P-ATP]（比活度約為500cpm / pmol，根據(jù)需要濃縮）。通過(guò)添加MgATP混合物引發(fā)反應(yīng)。在室溫下孵育40分鐘后，通過(guò)加入5μL的3％磷酸溶液終止反應(yīng)。然后將10微升反應(yīng)物點(diǎn)在P30濾墊上，在75mM磷酸中洗滌3次，每次5分鐘，在甲醇中洗滌一次，然后干燥并閃爍計(jì)數(shù)。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化強(qiáng)度（1 / v）與抑制劑（i）的濃度（即LFM-A13）的倒數(shù)圖計(jì)算。從這個(gè)Dixon圖中，Ki表示EI復(fù)合體的解離常數(shù)，它由線**點(diǎn)確定[4]。