描述

Silvestrol是從Aglaia foveolata的果實(shí)和枝條中分離的真核翻譯起始因子 (eIF4A) 抑制劑。

相關(guān)類別

信號通路 >> 細(xì)胞周期/DNA損傷 >> 真核起始因子(eIF)

研究領(lǐng)域 >> 癌癥

天然產(chǎn)物 >> 其他

靶點(diǎn)

eIF4A[1]

體外研究

Silvestrol是一種特異性eIF4A靶向翻譯抑制劑。 Silvestrol對許多人類癌癥細(xì)胞系（如肺癌，前列腺癌和乳腺癌）具有顯著的細(xì)胞毒活性，IC50值范圍為1至7 nM [1]。 Silvestrol顯著減少LNCaP細(xì)胞集落的數(shù)量。 Silvestrol（30 nM，120 nM）通過線粒體途徑誘導(dǎo)LNCaP細(xì)胞凋亡。 Apaf-1，Caspase-2，caspase-9和caspase-10參與Silvestrol誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但caspase-3和7不參與[2]。與對照細(xì)胞相比，Silvestrol（50nM）發(fā)揮立即抑制作用并引起近靜態(tài)細(xì)胞指數(shù)。與載體對照處理的細(xì)胞相比，Silvestrol（6.25nM）增強(qiáng)增殖，而更高濃度的Silvestrol（50nM）可抑制細(xì)胞增殖。 Silvestrol和episilvestrol與順鉑聯(lián)合使用可顯示出協(xié)同作用[3]。 Silvestrol以時(shí)間和劑量依賴性方式誘導(dǎo)胱天蛋白酶-3活化和凋亡細(xì)胞死亡。在缺乏功能性自噬蛋白的ATG7缺失小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）中，Silvestrol介導(dǎo)的細(xì)胞死亡減弱[4]。

體內(nèi)研究

Silvestrol（1.5mg / kg，ip）不會(huì)對小鼠中異種移植的B淋*巴細(xì)胞產(chǎn)生人IgG產(chǎn)生不利影響。與載體相比，Silvestrol顯著延長了存活期。在任何Silvestrol處理的小鼠的脾臟中都沒有檢測到這種淋*巴細(xì)胞浸潤，這些動(dòng)物在尸檢時(shí)也沒有表現(xiàn)出任何其他明顯的淋*巴瘤跡象[5]。

激酶實(shí)驗(yàn)

Apo-ONETM同源caspase-3/7檢測試劑盒用于測量caspase-3和-7的活性。將細(xì)胞（7×10 4細(xì)胞/ mL）用Silvestrol（15nM，30nM，60nM，120nM和240nM）或依托泊苷在黑色96孔板中處理24小時(shí)。已知Etoposide在LNCaP細(xì)胞中激活胱天蛋白酶-3/7，用作該測定的陽性對照。在處理結(jié)束時(shí)，將裂解緩沖液和底物（Z-DEVD-羅丹明110）混合并加入細(xì)胞中。在通過胱天蛋白酶-3和-7活性連續(xù)切割和去除DEVD肽并在499nm激發(fā)時(shí)，羅丹明110離去基團(tuán)變得強(qiáng)烈發(fā)熒光。發(fā)射*大值為521nm。產(chǎn)生的熒光產(chǎn)物的量與樣品中存在的胱天蛋白酶-3和-7裂解活性的量成比例。樣品一式三份測量。 Caspase-3和-7活性由凈熒光指示[2]。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞以7×10 4個(gè)細(xì)胞/ mL的密度接種在100-mm培養(yǎng)皿中，并用30nM或120nM濃度的Silvestrol處理24小時(shí)。將細(xì)胞用胰蛋白酶消化，用PBS洗滌，并用PBS中的1％（w / v）多聚甲醛在冰上固定30分鐘。離心后，將細(xì)胞在-20℃下懸浮于70％（v / v）乙醇中直至使用。從反應(yīng)管中除去所有乙醇，用PBS洗滌細(xì)胞兩次。處理細(xì)胞用于在22℃-24℃下用熒光素標(biāo)記的脫氧尿苷三磷酸核苷酸標(biāo)記過夜，洗滌，并在室溫下與碘化丙錠/ RNase A溶液在黑暗中孵育30分鐘。然后通過流式細(xì)胞術(shù)分析標(biāo)記的細(xì)胞[2]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

小鼠[5]通過用抗去唾液酸（GM1）預(yù)處理（加上每周再**），將外周血單核細(xì)胞（PBMC）腹膜內(nèi)（IP）注射到耗盡小鼠自然殺傷（NK）細(xì)胞的SCID小鼠中。通過hu-IgG ELISA確認(rèn)植入。在植入后2周開始用載體（30％羥丙基-β-環(huán)糊精）或Silvestrol（每48小時(shí)IP 1.5mg / kg）處理[5]。

密度

1.5±0.1 g/cm3

沸點(diǎn)

800.8±65.0 °C at 760 mmHg

分子式

C34H38O13

分子量

654.658

閃點(diǎn)

252.4±27.8 °C

精*確質(zhì)量

654.231262

PSA

171.83000

LogP

2.32

蒸汽壓

0.0±3.0 mmHg at 25°C

折射率

1.652

(1R,2R,3S,3aR,8bS)-6-[[(2S,3R,6R)-6-[(1R)-1,2-Dihydroxyethyl]-3-methoxy-1,4-dioxan-2-yl]oxy]-2,3,3a,8b-tetrahydro-1,8b-dihydroxy-8-methoxy-3a-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-1H-cyclopenta[b]benzofuran-2-carboxylic acid methyl ester

1H-Benzo[b]cyclopenta[d]furan-2-carboxylic acid, 6-[[(2S,3R,6R)-6-[(1R)-1,2-dihydroxyethyl]-3-methoxy-1,4-dioxan-2-yl]oxy]-2,3,3a,8b-tetrahydro-1,8b-dihydroxy-8-methoxy-3a-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-, methyl ester, (1R,2R,3S,3aR,8bS)-

Methyl (1R,2R,3S,3aR,8bS)-6-({(2S,3R,6R)-6-[(1R)-1,2-dihydroxyethyl]-3-methoxy-1,4-dioxan-2-yl}oxy)-1,8b-dihydroxy-8-methoxy-3a-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-2,3,3a,8b-tetrahydro-1H-benzo[b]cyclopenta[d]furan-2-carboxylate

silvestrol